همسانه سازی ژن گلوتامات دکربوکسیلاز باکتری لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس و ساخت وکتور بیانی آن

گاما آمینوبوتیریک اسید (گابا) یک اسیدآمینه غیر پروتئینی است که علاوه بر نقش عصب میانجی مهاری در بافت مغز پستانداران، دارای چندین عملکرد کاراندام شناختی (فیزیولوژی) مانند کاهش فشارخون و اثرات مدری دارا هست. گابا تقریبا در تمامی موجوذات زنده تولید می شود. در انسان، گابا به وسیله 2 ایزو فرم از زی مایه گلوتامات دکربوکسیلاز وابسته به پیریدوکسال فسفات تولید می شود. این دو ایزوفرم gad65 و gad67 می باشند که هردو ایزوفرم در مغز و در سلولهای لوزالمعده بیان می شوند. مشابهت ساختار مولکولی اینها با پروتئین 2c (p2c) ویروس کوکساکی می تواند سبب تحریک دستگاه ایمنی شده و بنابراین در ایجاد دیابت نوع یک نقش داشته باشد. بعضی از باکتری ها مانند سویه های لاکتوباسیلوس، قادر به تولید گابا هستند. در این تحقیق، همسانه سازی ژن gad در باکتری های لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس، لاکتوباسیلوس دلبروکی زیرگونه بولگاریکوس و استرپتوکوکوس سالیواریوس زیرگونه ترموفیلوس مطالعه شد. بررسی های فیلوژنتیک مبتنی بر توالی 16srrna و مطالعات بیوشیمیایی نشان داد که آن ها متعلق به خانواده لاکتوباسیلوس هستند. این سوش ها در محیط کشت mrs حاوی 1% اسید گلوتامیک در 30 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت کشت داده شدند. سپس قطعه dna حاوی ژن gad از ncbi به دست آمد. برای همسانه سازی ژن gad از این سویه ها، pcr با استفاده از آغازگرهای اختصاصی طراحی شده با اولیگو 7 انجام شد. محصول pcr از ژل استخراج شد و در وکتور pgem-t توسط لیگاز t4، الحاق شد و به داخل باکتری ای کولای xl1blue ترانس فورم شد. سپس کلنی های سفید انتخاب شده و پس از استخراج پلاسمید و برش با زی مایه های محدودکننده، ژن gad به یک وکتور pet الحاق شد و در باکتری ای کولای bl21 ترانس فورم شد. وجود ژن gad در باکتری با روش کلنی pcr تائید شد. نتایج این مطالعات نشان داد که این سویه ها را می توان در صنعت برای تولید غذاهای تخمیری حاوی گابا به کاربرد.